Studie probeerde levend virus te kweken uit 'positief' monster. In 69 procent van de gevallen kon het het niet

56% van de monsters van volwassenen en 79% van kinderen bevatten geen levend virus

Noot van de redactie: En dat is met de studie die alleen monsters gebruikt met zeer lage cycli onder de 25 voor kinderen en onder de 18 voor volwassenen. Doorgaans wordt u als "positief" beschouwd, zelfs wanneer een virusfragment pas na 35 of zelfs 45 cycli (duplicaties) wordt gevonden.


Abstract

 

ACHTERGROND: De rol van kinderen bij de overdracht en verspreiding van het ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is onduidelijk. We wilden de besmettelijkheid van SARS-CoV-2 kwantificeren in nasofaryngeale monsters van kinderen in vergelijking met volwassenen.

 

Methode: We hebben nasofaryngeale uitstrijkjes verkregen van volwassen en pediatrische gevallen van coronavirusziekte 2019 (COVID-19) en van hun contacten die tussen maart en december 2 positief testten op SARS-CoV-2020 in Manitoba. We vergeleken virale groei in celcultuur, cyclusdrempelwaarden van de reverse transcriptie polymerase kettingreactie (RT-PCR) van het SARS-CoV-2 envelop (E) gen en de 50% weefselkweek infectieuze dosis (TCID50/mL) tussen volwassenen en kinderen.

 

RESULTATEN: Van de 305 monsters die door RT-PCR positief waren voor SARS-CoV-2, waren er 97 monsters van kinderen van 10 jaar of jonger, 78 van kinderen van 11-17 jaar en 130 van volwassenen (≥ 18 jaar). Virale groei in kweek was aanwezig in 31% van de monsters, waaronder 18 (19%) monsters van kinderen van 10 jaar of jonger, 18 (23%) van kinderen van 11-17 jaar en 57 (44%) van volwassenen (kinderen versus volwassenen, odds ratio 0.45, 95% betrouwbaarheidsinterval [BI] 0.28-0.72). De cyclusdrempel was 25.1 (95%-BI 17.7–31.3) bij kinderen van 10 jaar of jonger, 22.2 (95%-BI 18.3–29.0) bij kinderen van 11-17 jaar en 18.7 jaar (95%-BI 17.9–30.4) bij volwassenen (p < 0.001). De mediane TCID50/ml was significant lager bij kinderen van 11–17 jaar (316, interkwartielbereik [IQR] 178–2125) dan bij volwassenen (5620, IQR 1171 tot 17, p <0.001). Cyclusdrempel was een nauwkeurige voorspeller van positieve cultuur bij zowel kinderen als volwassenen (gebied onder de ontvanger-operatorcurve, 0.87, 95% BI 0.81-0.93 v. 0.89, 95% BI 0.83-0.96, p = 0.6).

 

Interpretatie: In vergelijking met volwassenen hadden kinderen met nasofaryngeale uitstrijkjes die positief testten op SARS-CoV-2 minder kans om het virus in kweek te laten groeien, en hadden ze hogere cyclusdrempels en lagere virale concentraties, wat suggereert dat kinderen niet de belangrijkste aanjagers van SARS-CoV-2 zijn. overdragen.

Ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) en de niet-farmaceutische volksgezondheidsinterventies (NPI's) om het onder controle te houden, hebben een aanzienlijke impact gehad op de samenleving. Bij volksgezondheidsinspanningen om de verspreiding van de coronavirusziekte 2019 (COVID-19) te verminderen, zijn een aantal NPI's in dienst genomen, waaronder opschorting van persoonlijk schoolbezoek voor schoolgaande kinderen. Deze beslissingen waren grotendeels gebaseerd op historische observaties dat kinderen een substantiële rol speelden als aanjagers van overdracht van epidemische respiratoire virussen, zoals griep.1 In het geval van SARS-CoV-2 blijft de rol van kinderen bij de overdracht onduidelijk, gezien de weinige onderzoeken met tegenstrijdige gegevens.2-9 De meeste studies zijn beperkt tot epidemiologisch onderzoek waarvan de richting van overdracht moeilijk te onderscheiden is.3-7,9 Als alternatieve bewijslijn hebben sommige onderzoeken de rol van de virale dynamiek van SARS-CoV-2 onderzocht, ook met heterogene resultaten. Van deze onderzoeken hebben sommige hogere virale lasten aangetoond in de nasopharynx van pediatrische cohorten op basis van polymerasekettingreactietests, terwijl andere vergelijkbare niveaus van SARS-CoV-2 bij kinderen en volwassenen lieten zien.2,8,10,11 Bovendien heeft bewijs met betrekking tot andere virussen aangetoond dat detecteerbaar viraal RNA voorbij besmettelijkheid kan blijven bestaan.3,4 Een belangrijke proxy van in vivo besmettelijkheid is herstel van levend virus op celcultuur. Beoordeling van deze kritieke dimensie ontbrak in vrijwel alle pediatrische onderzoeken, waardoor het vermogen om een ​​meer volledige risico-batenanalyse uit te voeren bij het overwegen van de rol van kinderen bij de overdracht van SARS-CoV-2 wordt beperkt. Er zijn aanwijzingen dat de besmettelijkheid van SARS-CoV-2 kan worden voorspeld met behulp van beschikbare gegevens, zoals de cyclusdrempel van de omgekeerde transcriptie-polymerasekettingreactie (RT-PCR).12,13 Cyclusdrempel is een relatieve maatstaf voor de hoeveelheid genetisch materiaal, waarbij lagere waarden de aanwezigheid van meer viraal genetisch materiaal in het monster aangeven.

Aangezien een toenemend aantal rechtsgebieden overweegt of leren op school, kinderdagverblijven en buitenschoolse activiteiten moeten worden voortgezet of hervat, is een beter begrip van de relatieve bijdragen van kinderen en adolescenten aan de overdracht van SARS-CoV-2, in vergelijking met volwassenen, van essentieel belang. Dit is vooral belangrijk gezien de verhoogde kans op asymptomatische infectie in deze groep.14,15 Ons doel was om de percentages van SARS-CoV-2-cultuurpositiviteit te kwantificeren van nasofaryngeale uitstrijkjes die positief waren voor het virus na RT-PCR-testen bij kinderen. Vervolgens hebben we de viral load en titers in kweekpositieve specimens gekarakteriseerd en vergeleken met een volwassen groep.

Methoden

Studiepopulatie en ontwerp

Vanaf juli 2020 had de provincie Manitoba, Canada (bevolking 1.4 miljoen) grootschalige uitbraken van COVID-19. Om de overdracht te beperken, werden uitgebreide testen van casecontacten uitgevoerd. Definities van COVID-19-gevallen en casuscontacten worden gegeven in bijlage 1, beschikbaar op: www.cmaj.ca/lookup/doi/10.1503/cmaj.210263/tab-related-content.

We hebben nasofaryngeale uitstrijkjes verkregen van patiënten met COVID-19 en hun contacten. Monster RT-PCR-tests werden uitgevoerd door het Cadham Provincial Laboratory, het referentielaboratorium voor SARS-CoV-2-tests in Manitoba. Monsters werden verzameld op COVID-19-testlocaties en in viraal transportmedium naar het laboratorium vervoerd, meestal 1-4 dagen na verzameling. In het laboratorium werden de monsters 4 uur bewaard bij 24°C totdat ze werden getest zoals eerder beschreven.12 Alle monsters werden getest met behulp van door het laboratorium ontwikkelde tests om de variatie in de cyclusdrempel te minimaliseren.

We hebben alle monsters van kinderen die positief zijn voor SARS-CoV-2 na RT-PCR voor celkweek ingediend van maart tot augustus 2020. Naarmate het aantal gevallen toenam, werd een gemaksmonster van positieve monsters verstrekt aan het National Microbiology Laboratory voor celkweekanalyse. We selecteerden exemplaren uit de monsters van de voorgaande week om de versheid te garanderen en zo de opbrengst van de celcultuur te maximaliseren. In november hebben we met opzet pediatrische monsters geselecteerd met een cyclusdrempel van minder dan 25 om onze voorlopige observatie te bevestigen dat de kweekpositiviteitspercentages lager waren dan die bij volwassenen (alle pediatrische monsters van 27 maart tot 8 november 2020). Cyclusdrempelwaarden van minder dan 25 werden eerder bepaald om hogere kweekopbrengsten te hebben.12 Tegelijkertijd selecteerden we een gemakssteekproef van volwassen exemplaren met cyclusdrempelwaarden van 25 of minder ter vergelijking. Vóór de definitieve celcultuuranalyse hebben we een gemakssteekproef van monsters van volwassenen (verzameld van 12 maart tot 14 december 2020) geselecteerd voor celcultuur uit dezelfde gezondheidsregio's als pediatrische monsters.

Resultaten

Onze belangrijkste uitkomsten waren cultuurpositiviteitspercentages, RT-PCR-cycluswaarden, de infectieuze dosis van 50% weefselkweek (TCID50/mL), virale belasting (log RNA-kopieën/mL) en symptomen om de tijd te testen. Voor alle positieve monsters hebben we de RT-PCR-cyclusdrempelwaarden van het SARS-CoV-2-envelop (E)-gen verkregen. We hebben ook de cyclusdrempelwaarden van het menselijke RNAse P-gen verkregen, een endogene interne amplificatiecontrole die wordt gebruikt als een marker voor de kwaliteit van het nasofaryngeale monster.

De TCID50/mL-assay is een methode voor het kwantificeren van infectieuze virustiters. Het kwantificeert met name de hoeveelheid virus die nodig is om 50% van de weefselkweekcellen te doden, waardoor een cytopathisch effect ontstaat. De meeste monsters werden gedurende 80 weken bij -2°C bewaard voordat ze voor kweek werden verwerkt. Virale titers van monsters werden bepaald door het National Microbiology Laboratory (biocontainmentniveau 4) met behulp van TCID50/mL-assays (volledige methodologie beschreven in bijlage 1). In het kort werden serieel verdunde monsters op Vero-cellen geplaatst en 96-120 uur bij 37 ° C en in 5% COXNUMX geïncubeerd2 voor de TCID50 was gemeten.

Virale belasting wordt gewoonlijk gemeten als het logaritmische aantal RNA-genoomkopieën per milliliter (log RNA-kopieën/ml), een meer gestandaardiseerde kwantitatieve waarde dan cyclusdrempels. Voor deze studie en om de hoeveelheid viraal RNA die in elk monster aanwezig is te kwantificeren, hebben we een standaardcurve gegenereerd met behulp van een bekende hoeveelheid viraal RNA of gekopieerd DNA dat serieel werd verdund en tegelijkertijd met de testmonsters werd uitgevoerd om een ​​verband te leggen tussen cyclusdrempel en genoomkopieën/ml (bijlage 1).

We bepaalden de datum van het begin van de symptomen door middel van volksgezondheid, epidemiologie, surveillance en laboratoriumgegevens. We hebben ook het aantal dagen berekend vanaf het begin van de symptomen tot de monsterafname, ook wel de tijd van de symptomen tot de test genoemd, op basis van laboratoriumgegevens (zie bijlage 1).

statistische analyse

In ons vorige werk,12 we ontdekten dat volwassenen een cultuurpositiviteitspercentage van 28.9% hadden. Daarom hadden we 164 pediatrische monsters nodig om een ​​klinisch significant verschil (33% lager kweekpositiviteitspercentage bij een macht van 0.8 en α van 0.05) bij kinderen te detecteren.

We presenteren normaal verdeelde gegevens met gemiddelden en standaarddeviaties, en presenteren niet-normaal verdeelde gegevens met medianen en interkwartielbereiken (IQR's). We hebben de normaliteit beoordeeld met behulp van de Kolmorgorov-Smirnov-test. We hebben vergelijkingen tussen groepen uitgevoerd met behulp van de Student t test of de Mann-Whitney-test, en gebruikte de Fisher exact-test voor categorische gegevens. We vergeleken niet-parametrische groepsmedianen met behulp van Kruskal-Wallis-variantieanalyse. We voerden multivariabele logistische regressie uit met behulp van robuuste standaardfouten om voorspellers van positieve culturen te testen. We beschouwden tweezijdig p waarden kleiner dan 0.05 als significant. We hebben statistische analyses uitgevoerd met Stata versie 16.1 en GraphPad Prism 9.

Ethische goedkeuring

De studie werd uitgevoerd in overeenstemming met protocol HS23906 (H2020:211) en goedgekeurd door de Research Ethics Board van de University of Manitoba. De ethische raad zag af van de noodzaak van geïnformeerde toestemming, aangezien monsters werden verkregen als onderdeel van routinematig klinisch en volksgezondheidsbeheer en niet specifiek werden genomen voor opname in het huidige onderzoek.

resultaten

Tijdens de onderzoeksperiode werden in Manitoba ongeveer 360 000 nasofaryngeale uitstrijkjes uitgevoerd, waarvan er ongeveer 20 000 positief waren voor SARS-CoV-2. Ons uiteindelijke monster omvatte 305 gekweekte monsters, wat neerkomt op 1.5% van de positieve monsters in Manitoba en 7.2% (175 van 2440) positieve monsters bij kinderen. Van de 175 gekweekte pediatrische monsters waren 97 monsters afkomstig van kinderen van 10 jaar of jonger en 78 van kinderen van 11-17 jaar; deze werden vergeleken met 130 volwassen exemplaren. Baseline demografie, cyclusdrempels en virale RNA-belastingen worden weergegeven in: Tabel 1 als Tabel 2. We hebben het virus met succes gekweekt in 93 van de 305 monsters (31%), waaronder 57 van de 130 volwassenen (44%, 95% CI 35%-53%). Ter vergelijking: we kweekten het virus in slechts 18 van de 97 monsters bij kinderen van 10 jaar of jonger (19%, 95% BI 11%-28%, p < 0.001) en 18 van 78 monsters bij kinderen van 11–17 jaar oud (23%, 95% BI 14%–34%, p = 0.003). Het percentage positieve culturen verschilde niet tussen jongere en oudere kinderen (p = 0.5). Vergeleken met volwassenen hadden kinderen een 55% lagere kans om levend virus te laten groeien (odds ratio 0.45, 95% BI 0.28-0.72). Hoewel kinderen van 10 jaar of jonger meer kans hadden op asymptomatische infecties (47/97, ​​48%) dan kinderen van 11-17 jaar (19/78, 24%) of volwassenen (9/130, 7%) (p < 0.001 voor alle vergelijkingen), hadden alle kinderen van 17 jaar of jonger dezelfde kans om asymptomatisch te zijn, ongeacht of ze kweekpositieve of kweeknegatieve monsters hadden (42% versus 37%, p = 0.9).

Tabel 1:

Maatregelen van SARS-CoV-2-infectiviteit bij kinderen en volwassenen

Veranderlijk Kinderen ≤ 10 jaar
n = 97
Kinderen van 11–17 jaar
n = 78
Aantal personen
n = 130
p waarde
Asymptomatisch, nee. (%) 47 (48) 19 (24) 9 (7) <0.001§
Positieve cultuur, nee. (%, 95%-BI) 18 (19, 11-28) 18 (23, 14-34) 57 (44, 35-53) <0.001
Symptoom van testtijd, mediaan (IQR), d 1 (1-4) 2 (1-3.5) 2 (1-4) 0.6
Cyclusdrempel*, mediaan (IQR) 25.1 (17.7-31.3) 22.2 (18.3-29.0) 18.7 (17.9-30.4) <0.001**
RNAseP, gemiddelde ± SD 25.7 2.8 ± 26.1 2.6 ± 26.1 2.0 ± 0.6
TCID50/ml, mediaan (IQR) 1171 (316-5620) 316 (178-2125) 5620 (1171–17 800) <0.001† †
Log RNA-kopieën/ml, mediaan (IQR) 5.4 (3.5-7.8) 6.4 (4.2-7.6) 7.5 (5.2-8.3) <0.001‡‡
  • Opmerking: BI = betrouwbaarheidsinterval, IQR = interkwartielbereik, RT-PCR = reverse transcriptie-polymerasekettingreactie, SARS-CoV-2 = ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2, SD = standaarddeviatie.

  • * Cyclusdrempel is een semi-kwantitatieve maatstaf voor hoeveel genetisch materiaal aanwezig is in het initiële monster. Als er meer RT-PCR-cycli nodig zijn om SARS-CoV-2 te detecteren, was er minder viraal RNA in het monster aanwezig.

  •  Cyclusdrempelwaarden voor humaan RNAse P-gen, een endogene interne amplificatiecontrole, werden gebruikt als een marker voor de kwaliteit van het nasofaryngeale monster.

  •  Vijftig procent infectieuze dosis weefselkweek (TCID50) is een maat voor infectieuze virustiter en vertegenwoordigt de hoeveelheid virus die nodig is om 50% van de cellen in geïnoculeerde weefselkweek te doden.

  • § p waarde is < 0.001 voor alle vergelijkingen: kinderen ≤ 10 jaar in vergelijking met kinderen van 11-17 jaar, kinderen van 11-17 jaar in vergelijking met volwassenen en kinderen ≤ 10 jaar in vergelijking met volwassenen.

  •  p = 0.5 kinderen ≤ 10 jaar v. kinderen van 11–17 jaar; p = 0.003 kinderen van 11–17 jaar v. volwassenen; p < 0.001 kinderen ≤ 10 jaar v. volwassenen.

  • ** p = 0.99 kinderen ≤ 10 jaar v. kinderen van 11–17 jaar; p = 0.02 kinderen van 11–17 jaar v. volwassenen; p < 0.001 kinderen ≤ 10 jaar v. volwassenen.

  • † † p = 0.6 kinderen ≤ 10 jaar v. kinderen van 11–17 jaar; p < 0.001 kinderen van 11–17 jaar v. volwassenen; p = 0.1 kinderen ≤ 10 jaar v. volwassenen.

  • ‡‡ p = 0.99 kinderen ≤ 10 jaar v. kinderen van 11–17 jaar; p = 0.2 kinderen van 11–17 jaar v. volwassenen; p < 0.001 kinderen ≤ 10 jaar v. volwassenen.

 

Tabel 2:

Metingen van SARS-CoV-2-infectie in pediatrische kweekpositieve versus kweeknegatieve monsters

Veranderlijk Aantal (%) kweekpositieve monsters*
n = 36
Aantal (%) kweeknegatieve monsters*
n = 139
p waarde
Leeftijd, jr, mediaan (IQR) 10 (5-15) 9 (5-14) 0.6
Asymptomatisch 15 (42) 51 (37) 0.9
Mannelijk geslacht 22 (61) 80 (57) 0.7
Symptoom van testtijd, mediaan (IQR), d 1 (0-2) 2 (1-4) 0.3
Cyclusdrempel, mediaan (IQR) 16.8 (16.3-18.8) 25.8 (20.7-31.9) <0.001
Log RNA-kopieën/ml, mediaan (IQR) 8.1 (7.4-8.2) 5.2 (3.2-6.8) <0.001
  • Opmerking: IQR = interkwartielbereik, RT-PCR = omgekeerde transcriptie-polymerasekettingreactie, SARS-CoV-2 = ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2.

  • * Tenzij anders aangegeven.

  •  Cyclusdrempel is een semi-kwantitatieve maatstaf voor hoeveel genetisch materiaal aanwezig is in het initiële monster. Als er meer RT-PCR-cycli nodig zijn om SARS-CoV-2 te detecteren, was er minder viraal RNA in het monster aanwezig.

 

De kwaliteit van de nasofaryngeale monsters, zoals blijkt uit de cyclusdrempelwaarden van het humane RNAse P-gen, verschilde niet tussen de 3 leeftijdsgroepen (p = 0.6). De cyclusdrempel van het SARS-CoV-2 E-gen was lager bij volwassenen (18.7, IQR 17.9-30.4) dan bij kinderen van 10 jaar of jonger (25.1, IQR 17.7-31.3, p < 0.001) of kinderen van 11–17 jaar (22.2, IQR 18.3–29.0, p = 0.02) (Tabel 1 als Figuur 1).

Figuur 1:

Reverse transcriptie polymerase kettingreactiecyclus drempelwaarden van het ernstige acute respiratoire syndroom coronavirus 2-envelopgen per leeftijdsgroep. Volwassen monsters hadden een significant lagere cyclusdrempelwaarde (18.7, interkwartielbereik [IQR] 17.9–30.4) dan kinderen van ≤ 10 jaar (25.1, IQR 17.7–31.3; p < 0.001) en die van 11–17 jaar (22.2, IQR 18.3–29.0, p = 0.02).

De mediane TCID50/ml was significant lager voor kinderen van 11–17 jaar (316, IQR 178–2125) dan volwassenen (5620, IQR 1171–17 800, p < 0.001), maar verschillen tussen volwassenen en kinderen van 10 jaar of jonger (1171, IQR 316–5620, p = 0.1) bereikte geen statistische significantie (Tabel 1 als Figuur 2).

Figuur 2:

Weefselkweek infectieuze dosis 50% (TCID50/mL) per leeftijdsgroep. Volwassen monsters hadden een significant hogere TCID50/ml (5620, IQR 1171–17 800) dan kinderen van 11–17 jaar (316, interkwartielbereik [IQR] 178–2125, p < 0.001), maar waren niet significant hoger dan kinderen ≤ 10 jaar (1171, IQR 316 tot 5620, p = 0.1).

Er was geen verschil tussen kweekpositieve en kweeknegatieve monsters bij kinderen, behalve voor cyclusdrempelwaarden en log-RNA-kopieën/ml (Tabel 2). De mediane cyclusdrempel was lager in kweekpositieve monsters (16.8, IQR 16.3-18.8) dan in kweeknegatieve monsters (25.8, IQR 20.7–31.9, p < 0.001). De mediane log-RNA-kopieën/ml was hoger in kweekpositieve monsters 8.1, IQR 7.4–8.2) dan kweeknegatieve monsters (5.2, IQR 3.2–6.8, p < 0.001). De mediane symptomen om de tijd te testen waren echter niet verschillend tussen de kweekpositieve (1 d, IQR 0-2 d) en kweeknegatieve groepen (2 d, IQR 1-4 d, p = 0.3). De kans op een positieve kweek varieerde van symptomen tot testtijd, waarbij de kans dat een positieve kweek het grootst was bij monsters die 4-6 dagen na het begin van de symptomen werden verzameld, terwijl de cyclusdrempel minder variatie vertoonde tussen symptomen en testtijden (Figuur 3).

Figuur 3:

Symptoombegin tot testtijd (dagen), de gemiddelde drempelwaarde voor de cyclus van de revere transcriptie-polymerasekettingreactiecyclus van het envelopgen voor ernstige acute respiratoire syndroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) en de kans op succesvolle virale kweek in pediatrische monsters. De kans op SARS-CoV-2-cultuur wordt weergegeven door de roze balken. Zwarte lijnen vertegenwoordigen 95% betrouwbaarheidsintervallen. Cyclusdrempelwaarden worden weergegeven door de blauwe lijn, met cirkels die de mediaan vertegenwoordigen en blauwe balken die de 95%-betrouwbaarheidsintervallen vertegenwoordigen. Getallen boven de roze balk geven het aantal monsters per dag aan.

Receiver Operating Characteristic (ROC)-analyse van de cyclusdrempel om onderscheid te maken tussen kinderen met en zonder positieve virale cultuur toonde een gebied onder de ontvanger-operatorcurve (AUC) van 0.87 (95% BI 0.81-0.93) (bijlage 1, aanvullende figuur 1 ). De specificiteit van een cyclusdrempel van 23 was 97.2% (95%-BI 85.8%-99.9%) (bijlage 1, aanvullende tabel 1). Vergelijkbare resultaten werden gezien bij volwassenen (AUC 0.89, 95% BI 0.83-0.96, p = 0.6 v. kinderen) (Bijlage 1, Aanvullend Figuur 1, Aanvullende tabel 2). Symptomen tot testtijd waren niet zo nauwkeurig als de cyclusdrempel bij het onderscheiden tussen monsters met en zonder positieve virale cultuur (kinderen, AUC 0.67, 95% BI 0.55 tot 0.79 v. volwassenen, AUC 0.78, 95% BI 0.68–0.88, p = 0.2) (bijlage 1, aanvullende figuur 2), met een specificiteit van 100% (95%-BI 84.5%-100%) bij een testtijd van symptomen van meer dan 6 dagen. Merk op dat onze steekproef slechts 8 patiënten had met symptomen om de tijd van 6 dagen of meer te testen, wat de nauwkeurigheid van de resultaten in twijfel trekt bij het bepalen van een afkapperiode van symptomen om de tijd te testen voor positiviteit van celcultuur en mogelijke besmettelijkheid vanwege een tekort aan kracht.

Multivariabele logistische regressie toonde aan dat, voor pediatrische monsters, de cyclusdrempel een onafhankelijke voorspeller was van positieve kweek (odds ratio 0.81, 95% BI 0.69-0.94), maar symptomen op testtijd, leeftijd en geslacht waren dat niet (Tabel 3).

Tabel 3:

Multivariabel logistisch regressiemodel van metingen geassocieerd met een positieve virale cultuur van pediatrische monsters

In een aanvullende analyse vonden we geen verschil in cultuurpositieve percentages tussen kinderen van 0-4 jaar in vergelijking met kinderen van 5-10 jaar. Het niveau van het virus (gebaseerd op TCID50/mL) verschilde ook niet tussen cultuurpositieve monsters van kinderen in deze 2 leeftijdsgroepen.

Interpretatie

Onze resultaten laten zien dat monsters van 175 kinderen van 17 jaar of jonger ongeveer de helft minder kans hadden om kweekbaar virus te bevatten dan monsters van volwassenen. Toen SARS-CoV-2 met succes werd gekweekt, was de mediane TCID50/mL was significant lager voor pediatrische monsters dan voor volwassenen, wat betekent dat er minder levensvatbaar virus aanwezig was. Bovendien was het cultuurpositiviteitspercentage van monsters van kinderen van 10 jaar of jonger significant lager dan voor kinderen van 11-17 jaar of volwassenen. Deze resultaten illustreren dat RT-PCR-positiviteit niet noodzakelijk gelijk staat aan kweekpositiviteit, aangezien RT-PCR-positiviteit alleen geen onderscheid maakt tussen levend virus bij een infectieuze patiënt en achtergebleven viraal RNA bij een patiënt die mogelijk niet langer infectieus is.

We ontdekten dat de cyclusdrempelwaarde zeer voorspellend was voor cultuurpositiviteit. Daarentegen konden de symptomen om de tijd te testen geen onderscheid maken tussen kinderen met positieve en negatieve culturen. Dus bij kinderen die positief zijn getest op SARS-CoV-2 door RT-PCR, kan het kennen van de cyclusdrempelwaarde meer informatief zijn voor het bepalen van de mogelijke besmettelijkheid van een kind, en kan dit gevolgen hebben voor de duur van isolatie.

Deze resultaten zijn in tegenstelling tot wat is waargenomen met andere respiratoire virussen waarvoor een efficiënte infectie en overdracht bij kinderen vaak een wijdverbreide overdracht in de gemeenschap inluidt. Deze bevindingen komen echter overeen met epidemiologische onderzoeken die een beperkte verspreiding van SARS-CoV-2 van kinderen jonger dan 10 jaar aantonen.16,17 Een recent seroprevalentieonderzoek uit Duitsland toonde aan dat kinderen, met name kinderen van 1-10 jaar, een significant lagere seropositiviteit hebben dan hun ouders, waardoor onopgemerkte asymptomatische infecties bij kinderen minder waarschijnlijk zijn.18 Een meta-analyse toonde aan dat kinderen een lagere gevoeligheid hebben voor SARS-CoV-2 en mogelijk niet in dezelfde mate de overdracht door de gemeenschap stimuleren als volwassenen.19 Ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2 heeft ook een overdreven verspreid reproductiegetal (RO), wat suggereert dat de transmissiedynamiek fundamenteel anders is dan epidemische seizoensgebonden respiratoire virussen.20-22 Overdispersie verwijst naar een grote variatie op individueel niveau in de verdeling van het aantal secundaire transmissies, wat kan leiden tot zogenaamde "superspreading"-gebeurtenissen.21

Anderen hebben gekeken naar het vermogen om levend virus te kweken uit pediatrische monsters, de gouden standaard voor microbiologische diagnose. L'Huillier en collega's kweekten levend virus uit een groter aantal pediatrische monsters dan onze studie (52%; 12/23, v. 31% in onze gecombineerde monsters).11 Hun bevindingen van symptomen om de tijd te testen waren vergelijkbaar met wat we hebben waargenomen, en de 95% CI's van onze resultaten overlappen die van hen bijna, wat suggereert dat hun kleinere steekproefomvang verantwoordelijk kan zijn voor hun hogere aandeel cultuurpositieve resultaten. Bij nadere inspectie van de L'Huillier-gegevens blijkt echter dat, in overeenstemming met onze huidige studie, de cultuurpositiviteit varieerde met de leeftijd, zodat het virus werd gekweekt bij slechts 4 van de 11 (36.4%) kinderen van 10 jaar of jonger, maar 8 van de 12 (66.6%) kinderen van 11 jaar of ouder. Erkennend dat de cyclusdrempel een beperkte surrogaat van de virale belasting is, hebben andere onderzoeken geprobeerd de virale belasting bij kinderen verder te kwantificeren door gebruik te maken van log RNA-kopieën/ml op basis van gestandaardiseerde curven. Hoewel deze benadering het vermogen om gegevens over tijd en laboratoria te vergelijken verbetert, blijft het een surrogaatmaat voor levensvatbare virale belasting, kan het herstelbare levende virus niet voorspellen en is het kwetsbaar voor verwarring door het afstoten van niet-infectieus viraal genetisch materiaal. Als zodanig hebben gevolgtrekkingen van metingen van virale belasting die zijn afgeleid van cyclusdrempelgegevens aanzienlijke beperkingen. We hebben de virale aanwezigheid gekwantificeerd door het gebruik van TCID50/mL, wat extra onderscheidend vermogen biedt in vergelijking met methoden die de analyse beperken tot alleen de aan- of afwezigheid van een cytopathisch effect.11

De waarneming van een cyclusdrempelwaarde van meer dan 23, wat wijst op een significant verminderd risico op het herstellen van levend virus, is de moeite waard om in een grotere studie te onderzoeken. Deze waarde komt overeen met ons eerdere werk dat een verminderd vermogen aantoonde om levend virus te laten groeien in volwassen monsters waarbij de cyclusdrempel groter was dan 24.12 Ten slotte moet het definiëren van een robuuste op symptomen gebaseerde afkapperiode voor positiviteit van celculturen worden ondernomen, hoewel testen vaak kort na het begin van de symptomen plaatsvindt. Het kan een uitdaging zijn om deze vraag te beantwoorden in de huidige COVID-19-testomgeving.

Beperkingen

Andere mogelijke verklaringen voor onze bevindingen moeten worden overwogen. Virale genetische variatie kan een rol spelen; genomische surveillance toont echter aan dat monsters de diverse wereldwijde lijnen vertegenwoordigden die aanwezig waren in de eerste en daaropvolgende golven van gevallen in Manitoba. Het verzamelen van monsters van kinderen kan een uitdaging zijn, wat resulteert in een suboptimaal monster. Het ontbreken van significante verschillen in cyclusdrempelwaarden van RNAse P (een endogene interne controle), suggereert echter een vergelijkbare kwaliteit van de bemonstering tussen leeftijdsgroepen. Degradatie van monsters tijdens opslag, wat de kans op viraal herstel beïnvloedt, werd ook overwogen, maar de tijd tot celkweek was vergelijkbaar tussen leeftijdsgroepen, waardoor deze mogelijkheid onwaarschijnlijk was.

Hoewel jonge kinderen symptomen hadden die vergelijkbaar waren met de testtijd, kunnen kinderen op een ander tijdstip na de blootstelling het meest besmettelijk zijn dan adolescenten of volwassenen. Onze lokale epidemiologie (niet-gepubliceerde gegevens, 2021) ondersteunt dit argument niet, aangezien pediatrische gevallen van COVID-19 consistent zijn met overdracht door de gemeenschap.23,24 Het is mogelijk dat kinderen zich op een ander punt in hun virale traject bevonden dan adolescenten en volwassenen toen ze werden bemonsterd. Omdat er slechts één monster werd genomen, zou het niet mogelijk zijn om de longitudinale trend in de cyclusdrempelwaarde te bepalen ten opzichte van de bemonsteringstijd. Regressieanalyse (gegevens niet getoond) van volwassenen en kinderen toonde geen correlatie tussen symptomen en testtijd en cyclusdrempel of TCID50/ml-waarde. Recall bias van het begin van de symptomen is mogelijk en de symptomen kunnen subtiel zijn bij kinderen, waardoor de recall bias wordt vergroot, maar dit is waarschijnlijk gelijk verdeeld over alle patiënten. Ten slotte kunnen we er niet zeker van zijn dat onze bevindingen van toepassing zijn op nieuwe SARS-CoV-2-varianten die hogere niveaus van besmettelijkheid hebben laten zien, aangezien dergelijke varianten tijdens de onderzoeksperiode niet vaak circuleerden.

Conclusie

We ontdekten dat SARS-CoV-2 minder vaak groeide uit pediatrische monsters dan volwassen monsters, en toen het virus met succes werd gekweekt, was er significant minder levensvatbaar virus aanwezig. Deze gegevens, samen met onze lokale epidemiologie, suggereren dat kinderen niet de belangrijkste aanjagers van de overdracht van SARS-CoV-2 lijken te zijn. Onze bevindingen hebben belangrijke volksgezondheids- en klinische implicaties. Als jongere kinderen minder in staat zijn om besmettelijke virussen over te dragen, kunnen dagopvang, persoonlijke school en voorzichtige buitenschoolse activiteiten veilig zijn om door te gaan, met de juiste voorzorgsmaatregelen, en met een lager risico voor kinderopvangpersoneel, opvoeders en ondersteunend personeel dan aanvankelijk verwacht. Gezien de moeilijkheden om kinderen in de thuisomgeving geïsoleerd te houden en de aanzienlijke impact van langdurige isolatie op zowel de ontwikkeling van het kind als de ouderlijke functie (zoals verlies van werk of inkomen), zou een robuust instrument om de duur van of de noodzaak van quarantaine te verminderen een belangrijke ontwikkeling voor de volksgezondheid zijn.

Dankwoord

Dit werk werd ondersteund door de gezamenlijke inspanningen in de volksgezondheidsrespons op de COVID-19-pandemie door Manitoba Health, Cadham Provincial Laboratory, de Public Health Agency of Canada en het National Microbiology Laboratory. De auteurs bedanken ook de leraren en opvoeders, die de kinderen van Manitoba en de kinderen zelf een beetje normaal hebben gemaakt.

voetnoten

  • Concurrerende belangen: Lauren Garnett, Kaylie Tran, Alex Bello en James Strong rapporteren A-base financiering van de regering van Canada. Geen andere concurrerende belangen werden verklaard.

  • Dit artikel is door vakgenoten beoordeeld.

  • Medewerkers: Alle auteurs hebben bijgedragen aan de conceptie en het ontwerp van het werk, en de verwerving, analyse en interpretatie van gegevens. Alle auteurs stelden het manuscript op, herzagen het kritisch voor belangrijke intellectuele inhoud, gaven de definitieve goedkeuring van de te publiceren versie en stemden ermee in verantwoordelijk te zijn voor alle aspecten van het werk.

  • Het delen van gegevens: Gegevens met mogelijke persoonlijke gezondheidsinformatie kunnen niet worden gedeeld door Manitoba Health en worden gereguleerd door de Health Information Privacy Committee (HIPC) onder de Public Health Information Act van Manitoba. Op verzoek kunnen gegevens die op passende wijze zijn geanonimiseerd en geanonimiseerd, aan onderzoekers worden verstrekt in overleg met de corresponderende auteur.

  • Aanvaard Maart 30, 2021.

Dit is een Open Access-artikel dat wordt gedistribueerd in overeenstemming met de voorwaarden van de Creative Commons Attribution-licentie (CC BY-NC-ND 4.0), die gebruik, distributie en reproductie in elk medium toestaat, op voorwaarde dat de originele publicatie correct wordt geciteerd, het gebruik niet-commercieel is (dwz voor onderzoek of educatief gebruik), en er worden geen wijzigingen of aanpassingen aangebracht. Zien: https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/

Referenties

Bron: Canadian Medical Association Journal

Aanmelden
Melden van
guest
8 Comments
Oudste
Nieuwste Meest Gestemd
Inline feedbacks
Bekijk alle reacties

ken
gezichtskring
7 dagen geleden

(rofl)

Hoe zouden ze het virus herkennen?

Het is nooit gezuiverd tot een enkel virus, de genoomsequentie is daarom onbekend.

aardvark-gnosis
Actief lid
aardvarken-gnosis (@aardvark-gnosis)
6 dagen geleden

Gebaseerd op wat ik heb gelezen.. De maker van de PCR-test zei, "dat deze test nooit is ontworpen om te worden gebruikt zoals hij wordt gebruikt". Toch staan ​​er nog steeds mensen in de rij om getest te worden als schapen voor de slacht... Informatie-zijwegen zijn gevuld met verkeerde informatie en regelrechte leugens!

Zie hoe de leugens leiden tot professionele toewijzing zoals beschreven in deze URL
< https://www.cracknewz.com/2021/10/were-in-middle-of-major-biological_10.html >

Jij bent de rechter en doet je eigen onderzoek... Je onderbuikgevoel en gezond verstand, als dat er is, zou de diepgewortelde intuïtieve geest van onderscheidende kennis moeten beschimpen zonder dat je hoeft te worden onderwezen en geconditioneerd om een ​​veranderde realiteit of matrix als feit te beschouwen!

A_G

6 dagen geleden voor het laatst bewerkt door aardvark-gnosis
brtanner
Lid
brtanner (@brtanner)
6 dagen geleden

GEEN virus is NOOIT met succes in vitro in een cellijn gekweekt. Als je kranten leest die beweren dat iemand dat heeft, zul je zien dat er geen isolatie van een "virus" is geweest of dat er geen genetisch materiaal is geëxtraheerd.

Daz
Daz
6 dagen geleden

Zoals ik al 18 maanden zeg: complete en volslagen fraude.
Covid heeft nooit bestaan ​​buiten het pysop-codewoord voor griep.

Curmudgeon
vrek
6 dagen geleden

Ik woon in Manitoba. De angstporno is wijdverbreid. In deze "studie" ontbreekt het feit dat Dr. Reiner Fuellmich veel eerder dan de studie ontdekte dat het "virus" een door de computer gegenereerd model was. Christine Massey begon de voedselketen te volgen van lokale gezondheidsautoriteiten tot de federale regering op zoek naar informatie over de virusisolatie. Hier is de reactie:
https://www.fluoridefreepeel.ca/wp-content/uploads/2020/06/Health-Canada-FinalResponse-A-2020-00208-2020-06-13.pdf
Dit roept de vraag op, wat probeerden ze precies te kweken voor de studie?

Rog
Rog
6 dagen geleden

De bovenstaande medisch klinkende gobbledygoup aangeboden door het ministerie van verduistering en dubbeldenken die niet verantwoordelijk is voor eventuele onnauwkeurige inhoud.

yuri
yuri
5 dagen geleden

voodoo-conclusies door boeren in het pro-imperium...griepvirus bestaat niet alleen, maar er zijn ook vaccins geproduceerd die effectief en onschadelijk zijn.... door het westen gecreëerde Covid-vaccins verrijken miljardairs en produceren veel bijwerkingen

Anti-rijk